實驗要點及說明：
1．本(ben)方法適(shi)用(yong)于貼(tie)壁細胞(bao)培養(yang)，而不適(shi)用(yong)于懸浮(fu)細胞(bao)培養(yang)，懸浮(fu)細胞(bao)可使用(yong)滴片法；
2．所(suo)使用(yong)的(de)蓋(gai)玻(bo)片應該為優質玻(bo)璃，并經(jing)過(guo)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易(yi)碎，取放(fang)蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要(yao)更多(duo)生(sheng)長狀(zhuang)態一致(zhi)的細胞，可以使用較(jiao)大(da)的培養皿，但(dan)不宜過(guo)大(da)，以避免培養液的浪(lang)費和增加(jia)污(wu)染機率；
5．如果(guo)細胞貼(tie)壁生(sheng)長能力較差，可將蓋玻(bo)片在0.5%多聚賴(lai)氨酸溶液中(zhong)浸泡5-10分鐘(zhong)并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究，作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹：
產品名稱 | 生長特性(xing) | 貨號 |
前列腺癌細(xi)胞(bao)；DU145[DU145；DU-145] | 貼壁生長 | EY-X63215 |
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細胞名稱 前列腺癌細胞；DU145[DU145；DU-145]
形態特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: DU145是從一位有3年淋巴細胞白血病史的前列腺癌患者的腦部轉移灶中建立的。該細胞系未檢測到激素敏感性，酸性磷酸酶陽性，單個的細胞可在軟瓊脂中形成集落。對此細胞和原始腫瘤的亞顯微結構分析可見微絨毛、微絲、細胞橋粒、線粒體、發達的高爾基體和異質溶酶體。該細胞不表達前列腺抗原。
培養條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法: 1:4~1:6傳代；每周2~3次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養法（-）
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠(shu)心(xin)房組(zu)織，然(ran)后(hou)用(yong)PBS將此組(zu)織塊清洗2次，將成1mm3左(zuo)右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消(xiao)化(hua)液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置(zhi)37℃條件下(xia)消(xiao)化(hua)10min，之后(hou)用滴管吹(chui)打制成(cheng)單細胞懸液，自然(ran)沉淀并收集上(shang)清(qing)，用含(han)10% FBS培養基終止消(xiao)化(hua)后(hou)4℃放置(zhi)；
3、剩下的(de)組(zu)(zu)織再加入(ru)3～4mL酶消化(hua)液，混懸10s，置37℃消化(hua)10 min后，按上述方法收(shou)集上清并終止消化(hua)后4℃放置，重(zhong)復(fu)此步驟2-3次，直至(zhi)組(zu)(zu)織*被消化(hua)；
4、用(yong)(yong)200目不銹鋼(gang)篩(shai)網過(guo)濾細(xi)胞消化液，1200r/min 離(li)心(xin)10min，棄去(qu)上清，沉淀細(xi)胞用(yong)(yong)含(han)有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于(yu)25cm2培養瓶，放置于(yu)37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后(hou)，吸出(chu)培(pei)養基，按實驗需要接(jie)種于(yu)6孔板中繼續培(pei)養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房(fang)肌細(xi)(xi)胞生長至80%融合時(shi)，棄去培(pei)養基，用溫育的PBS沖洗細(xi)(xi)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲(jia)醛(quan)在室溫條件(jian)下(xia)固定細(xi)(xi)胞15min；
2、PBS沖洗細(xi)胞2次，每次10min，然后在4℃條(tiao)件下，用0.1％Triton X-100透膜(mo)15min；
3、PBS沖洗細(xi)胞2次，每次10min，然(ran)后(hou)在室(shi)溫條件下，用(yong)4% BSA封閉(bi)細(xi)胞30min；
4、按(an)1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰(bing)箱中孵(fu)育(yu)細胞(bao)過夜(ye)；
5、PBS沖洗(xi)細胞3次，每次10min，按1：150的(de)比例稀釋抗α-actin的(de)二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍(pai)照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除(chu)培養液(ye)，用無菌(jun) PBS、Hanks 液(ye)或(huo)無血清培養液(ye)洗滌(di)細胞一(yi)次，以(yi)去除(chu)殘余的(de)血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞(bao)即可，室溫放置(zhi) 0.5～2min， 不(bu)(bu)同的細胞(bao)消化(hua)時間有所不(bu)(bu)同。
③顯微鏡下(xia)觀(guan)察，細胞(bao)明(ming)顯收縮，并且肉(rou)眼觀(guan)察培養器皿(min)底部發現細胞(bao)的形態(tai)發生(sheng)明(ming)顯的變(bian)
化；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液，吹打下細胞，即可直接用于后續實驗。
④如(ru)果發現(xian)消(xiao)化不足，則(ze)加入 Trypsin-EDTA solution 重新消(xiao)化。
⑤如果發現細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)消化(hua)時間過長(chang)，未及(ji)吹打細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)，細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)已(yi)經有部分直(zhi)(zhi)接從培(pei)養(yang)器(qi)皿底部脫落， 直(zhi)(zhi)接用細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)把(ba)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)全(quan)部吹打下(xia)來(lai)。1000～2000g 離心 1min，沉淀(dian)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)，盡量去除細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)消化(hua)液(ye)后，加入含血清的(de)*培(pei)養(yang)液(ye)重新懸浮細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)，即可用于后續(xu)實驗。
2、組(zu)織(zhi)的(de)消(xiao)化不同的(de)組(zu)織(zhi)需要消(xiao)化的(de)時(shi)間相差很大(da)，通(tong)常以(yi)消(xiao)化后可(ke)以(yi)充(chong)分(fen)打散(san)組(zu)織(zhi)為宜。
腦瘤細胞；SF767形態特性: 多角生長特性: 貼壁生長Bovine Plasmin ELISA Kit
皮膚黑色素瘤細胞；SK-MEL-1形態特性: 球形生長特性: 懸浮生長Human Cathepsin L ELISA KIT
兔主動脈平滑肌細胞；SMC形態特性: 多角生長特性: 貼壁生長Human BMP-2 ELISA KIT
小鼠成纖維細胞；φ2形態特性: 成纖維細胞樣生長特性: 貼壁生長Rat GM-CSF ELISA KIT
小鼠骨髓瘤細胞；Sp2/0-Ag14[SP20]形態特性: 淋巴母細胞樣；圓形生長特性: 懸浮生長Human IL-1R4 ELISA KIT
腎上腺皮質癌細胞；SW-13形態特性: 上皮樣；多角生長特性: 貼壁生長Human IL-12 ELISA KIT
結直腸癌細胞；T84形態特性: 上皮樣；多角生長特性: 貼壁生長Human LOX-1 ELISA KIT
神經膠質細胞瘤細胞；U251形態特性: 多角生長特性: 貼壁生長Human IL-1 sRII ELISA KIT
急性單核細胞白血病細胞；THP-1形態特性: 單核細胞生長特性: 懸浮生長Human RNase A ELISA KIT
非洲綠猴腎細胞；VERO形態特性: 上皮樣細胞生長特性: 貼壁生長Human Complement factor H ELISA KIT
組織細胞淋巴瘤細胞；U937[U-937]形態特性: 單核細胞生長特性: 懸浮生長Mouse bFGF ELISA KIT
小鼠垂體瘤細胞(分泌促生長激素分泌激素)；AtT-20形態特性: 小圓形細胞生長特性: 貼壁生長Human Albumin ELISA KIT
小鼠小膠質細胞；BV2形態特性: 多形型生長特性: 半貼壁生長Human Thrombopoietin ELISA KIT
小鼠骨髓瘤細胞；Fox-NY形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長Rat IgG1 ELISA KIT
胃腺癌細胞；BGC-823形態特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Mouse Leptin ELISA KIT
兔主動脈平滑肌細胞；CCC-SMC-1形態特性: 多角生長特性: 貼壁生長Human α-fetoprotein ELISA KIT
前列腺癌細胞；DU145[DU145；DU-145]小鼠腫瘤標志物(CA724)ELISA試劑盒3-DPGELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠心鈉肽(ANP)ELISA試劑盒3-βDglucosidaseELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠毒性休克綜合征毒素1(TSST-1)ELISA試劑盒3-βDglucosidaseELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠補體1抑制物抗體(C1INH)ELISA試劑盒3-βDglucosidaseELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠對氨基苯甲酸(PABA)ELISA試劑盒3-βDglucosidaseELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠T細胞活化連接蛋白(LAT)ELISA試劑盒3-βDglucosidaseELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISA試劑盒5-AGELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PIAb-IgG/IgM)ELISA試劑盒5-HIAAELISAKit產品規格:48T/96T。
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